آټولوګس نیوکلیوس پلپوس د لمر فرعي کونډرال هډوکي کې ځای پرځای شوی ترڅو د موډیک بدلونونو حیواناتو ماډل رامینځته کړي

د Nature.com لیدلو لپاره مننه. د براوزر نسخه چې تاسو یې کاروئ محدود CSS ملاتړ لري. د غوره پایلو لپاره، موږ د نوي براوزر کارولو وړاندیز کوو (یا په انټرنیټ اکسپلورر کې د مطابقت حالت غیر فعال کړئ). په ورته وخت کې، د دوامداره ملاتړ ډاډ ترلاسه کولو لپاره، موږ به سایټ پرته له سټایلونو او جاواسکریپټ څخه ښکاره کړو.
د موډیک بدلون (MC) د څارویو ماډلونو رامینځته کول د MC مطالعې لپاره یو مهم اساس دی. د نیوزیلینډ پینځه څلویښت سپینه خرگوش د شرم عملیات ګروپ، د عضلاتو امپلانټیشن ګروپ (ME ګروپ) او د نیوکلیوس پلپوس امپلانټیشن ګروپ (NPE ګروپ) ویشل شوي. د NPE ګروپ کې، د انټرورټیبرل ډیسک د انټرو لیټرل لمبر جراحي طریقې لخوا افشا شوی و او د پای تختې ته نږدې د L5 vertebral بدن د پنچر کولو لپاره ستنه کارول شوې وه. NP د L1/2 intervertebral ډیسک څخه د سرنج په واسطه ایستل شوی او په هغې کې انجیکشن شوی. د فرعي کونډرال هډوکي کې سوراخ کول. د عضلاتو امپلانټیشن ګروپ او د شرم عملیات ګروپ کې د جراحي پروسیجرونه او د سوراخ کولو میتودونه د NP امپلانټیشن ګروپ کې ورته وو. په ME ګروپ کې، د عضلاتو یوه ټوټه سوري ته کیښودل شوه، پداسې حال کې چې د شرم عملیات ګروپ کې، هیڅ شی سوري ته نه و ایښودل شوی. د عملیاتو وروسته، د MRI سکینګ او مالیکول بیولوژیکي ازموینې ترسره شوې. د NPE ګروپ کې سیګنال بدل شو، مګر د شرم عملیات ګروپ او ME ګروپ کې کوم څرګند سیګنال بدلون نه و. د هسټولوژیکي مشاهدې ښودلې چې د امپلانټیشن سایټ کې د نسج غیر معمولي خپریدل لیدل شوي، او د IL-4، IL-17 او IFN-γ بیان د NPE ګروپ کې زیات شوی. په فرعي کونډرال هډوکي کې د NP لګول کولی شي د MC څاروي ماډل جوړ کړي.
موډیک بدلونونه (MC) د مقناطيسي ریزونانس امیجنګ (MRI) کې د فقراتي پای تختې او د هډوکي میرو سره نږدې زخمونه دي. دا په هغو اشخاصو کې خورا عام دي چې اړوند نښې لري. ډیری مطالعاتو د MC په اهمیت ټینګار کړی ځکه چې د ټیټ درد درد (LBP) 2,3 سره تړاو لري. de Roos et al.4 او Modic et al.5 په خپلواکه توګه لومړی د فقري هډوکي میرو کې د فرعي کونډرال سیګنال غیر معمولي درې مختلف ډولونه بیان کړل. د موډیک ډول I بدلونونه د T1 وزن لرونکي (T1W) ترتیبونو کې هایپوټینس او ​​د T2 وزن لرونکي (T2W) ترتیبونو کې هایپرټینس دي. دا زخم د هډوکي په مغز کې د فایسور پای تختې او نږدې ویسکولر گرینولیشن نسج څرګندوي. د موډیک ډول II بدلونونه په دواړو T1W او T2W ترتیبونو کې لوړ سیګنال ښیې. په دې ډول زخم کې، د پای تختې تخریب موندل کیدی شي، په بیله بیا د هډوکي میرو سره نږدې هسټولوژیکي غوړ بدلول. د موډیک ډول III بدلونونه په T1W او T2W ترتیبونو کې ټیټ سیګنال ښیې. سکلیروټیک زخمونه چې د پای تختو سره مطابقت لري لیدل شوي 6. MC د نخاع یوه رنځپوهنه ناروغي ګڼل کیږي او د نخاع 7,8,9 ډیری تخریبي ناروغیو سره نږدې تړاو لري.
د شته معلوماتو په پام کې نیولو سره، ډیری مطالعاتو د MC د ایټیولوژی او رنځپوهنې میکانیزمونو په اړه مفصل لیدونه وړاندې کړي. Albert et al. وړاندیز شوی چې MC ممکن د ډیسک هرنییشن له امله رامینځته شي. Hu et al. MC د ډیسک شدید انحطاط 10 ته منسوب شوی. کروک د "داخلي ډیسک راټیټ" مفهوم وړاندیز کړی، کوم چې وایي چې د تکرار ډیسک صدمه ممکن په پای کې د مایکروټیرز لامل شي. د خال خال جوړیدو وروسته، د نیوکلیوس پلپوس (NP) لخوا د پای تختې ویجاړول ممکن د اتومیمون غبرګون رامینځته کړي، کوم چې نور د MC11 پراختیا لامل کیږي. Ma et al. ورته نظر شریک کړ او راپور یې ورکړ چې د NP لخوا هڅول شوی اتوماتیک د MC12 په رنځپوهنه کې کلیدي رول لوبوي.
د معافیت سیسټم حجرې، په ځانګړې توګه CD4 + T مرستندویه لیمفوسایټ، د اتومیمونیت 13 په ناروغۍ کې مهم رول لوبوي. په دې وروستیو کې کشف شوی Th17 سبسیټ د پروینفلامیټري سایټوکین IL-17 تولیدوي، د کیموکین بیان هڅوي، او په زیانمن شوي ارګانونو کې د T حجرې هڅوي ترڅو IFN-γ14 تولید کړي. Th2 حجرې هم د معافیتي غبرګونونو په رنځپوهنه کې ځانګړی رول لوبوي. د Th2 حجرې د نمایندګۍ په توګه د IL-4 څرګندونه کولی شي د جدي معافیتي پایلو لامل شي.
که څه هم د MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 په اړه ډیری کلینیکي مطالعات ترسره شوي، مګر لاهم د مناسبو حیواناتو تجربوي ماډلونو نشتوالی شتون لري چې کولی شي د MC پروسې نقل کړي چې په مکرر ډول په انسانانو کې پیښیږي او کیدی شي. د ایټیولوژي یا نوي درملنې لکه هدف شوي درملنې تحقیق کولو لپاره کارول کیږي. تر اوسه پورې، د MC یوازې یو څو څاروي ماډلونه راپور شوي چې د اصلي رنځپوهنې میکانیزمونو مطالعه کوي.
د البرټ او ما لخوا وړاندیز شوي د اتوماتیک تیورۍ پراساس، دې څیړنې یو ساده او د بیا تولید وړ خرگوش MC ماډل رامینځته کړ چې د نخاعي فقري پای پلیټ ته نږدې NP د اتوماتیک ټرانسپلانټینګ لخوا رامینځته شوی. نورې موخې د څارویو د موډلونو د هسټولوژیکي ځانګړتیاوو څارنه او د MC په پراختیا کې د NP ځانګړي میکانیزمونه ارزول دي. د دې لپاره، موږ تخنیکونه لکه مالیکول بیولوژي، MRI، او هسټولوژیکي مطالعاتو څخه کار اخلو ترڅو د MC پرمختګ مطالعه کړو.
دوه خرگوشونه د جراحۍ په جریان کې د وینې له امله مړه شول، او څلور خرگوش د MRI په وخت کې د انستیزیا په وخت کې مړه شول. پاتې 48 خرگوش ژوندي پاتې شوي او د جراحۍ وروسته هیڅ ډول چلند یا عصبي نښې ندي ښودل شوي.
MRI ښیي چې په مختلفو سوراخونو کې د سرایت شوي نسج سیګنال شدت توپیر لري. د NPE ګروپ کې د L5 vertebral بدن د سیګنال شدت په تدریجي ډول د ننوتلو وروسته په 12، 16 او 20 اونیو کې بدل شو (د T1W ترتیب ټیټ سیګنال ښودلی ، او د T2W ترتیب مخلوط سیګنال او ټیټ سیګنال ښودلی) (انځور 1C) ، پداسې حال کې چې MRI څرګندیږي د نورو دوو ګروپونو د تړلو برخو څخه په ورته موده کې نسبتا باثباته پاتې دي (انځور. 1A، B).
(A) د 3 وخت په نقطو کې د خرگوش lumbar spine نمایندګي ترتیبي MRIs. د شرم عملیاتي ډلې په عکسونو کې د سیګنال اختلالات ندي موندل شوي. (B) په ME ګروپ کې د فقري بدن سیګنال ځانګړتیاوې د شرم عملیات ګروپ کې ورته دي، او د وخت په تیریدو سره د سرایت کولو سایټ کې کوم مهم سیګنال بدلون نه لیدل کیږي. (C) د NPE ګروپ کې، ټیټ سیګنال د T1W په ترتیب کې په ښکاره توګه لیدل کیږي، او مخلوط سیګنال او ټیټ سیګنال د T2W په ترتیب کې په ښکاره ډول لیدل کیږي. د 12-اونیو دورې څخه تر 20-اونیو پورې، د T2W په ترتیب کې د ټیټ سیګنالونو شاوخوا سپوراډیک لوړ سیګنالونه کمیږي.
ښکاره هډوکي هایپرپلاسیا د NPE ګروپ کې د فقري بدن د امپلانټیشن سایټ کې لیدل کیدی شي، او د هډوکي هایپرپلاسیا د NPE ګروپ په پرتله د 12 څخه تر 20 اونیو (انځور 2C) په چټکۍ سره واقع کیږي، په ماډل شوي فقري کې کوم مهم بدلون نه لیدل کیږي. جسدونه د شام ګروپ او ME ګروپ (انځور 2C) 2A,B).
(الف) په نصب شوي برخه کې د فقري بدن سطح خورا نرمه ده، سوري ښه روغ کیږي، او د فقري بدن کې هیڅ هایپرپلسیا شتون نلري. (B) په ME ګروپ کې د امپلان شوي سایټ شکل د شرم عملیات ګروپ سره ورته دی، او د وخت په تیریدو سره د امپلان شوي سایټ په بڼه کې کوم څرګند بدلون شتون نلري. (C) د هډوکي هایپرپلاسیا د NPE ګروپ کې د امپلان شوي سایټ کې واقع شوی. د هډوکي هایپرپلاسیا په چټکۍ سره وده وکړه او حتی د انټرورټیبرل ډیسک له لارې د متضاد فقري بدن ته غزیدلی.
هسټولوژیکي تحلیل د هډوکي جوړښت په اړه نور تفصيلي معلومات وړاندې کوي. 3 شکل د عملیات څخه وروسته برخو عکسونه ښیې چې د H&E سره رنګ شوي. د شمع عملیاتي ګروپ کې، کونډروسایټس په ښه توګه تنظیم شوي او د حجرو پراختیا نه ده موندل شوې (انځور 3A). په ME ګروپ کې وضعیت د شرم - عملیاتو ګروپ (3B انځور) ته ورته و. په هرصورت، په NPE ګروپ کې، د chondrocytes لوی شمیر او د NP په څیر حجرو پراخیدل د امپلانټیشن سایټ (انځور 3C) کې لیدل شوي؛
(A) Trabeculae د پای تختې ته نږدې لیدل کیدی شي، chondrocytes په منظم ډول د یونیفورم حجرو اندازې او شکل سره تنظیم شوي او هیڅ پراخوالی (40 ځله). (B) په ME ګروپ کې د امپلانټیشن سایټ حالت د شرم ګروپ سره ورته دی. Trabeculae او chondrocytes لیدل کیدی شي، مګر د امپلانټیشن سایټ کې (40 ځله) هیڅ ښکاره پراختیا شتون نلري. (B) دا لیدل کیدی شي چې د chondrocytes او NP په څیر حجرې د پام وړ وده کوي، او د chondrocytes شکل او اندازه غیر مساوي دي (40 ځله).
د انټرلیوکین 4 (IL-4) mRNA، انټرلیوکین 17 (IL-17) mRNA، او انټرفیرون γ (IFN-γ) mRNA په دواړو NPE او ME ګروپونو کې لیدل شوي. کله چې د هدف جینونو د بیان کچه پرتله شوه، د IL-4، IL-17، او IFN-γ جین څرګندونې د ME ګروپ او د شرم عملیات ګروپ (4 شکل) په پرتله د NPE ګروپ کې د پام وړ زیاتې شوې. (مخ <0.05). د شرم عملیاتي ګروپ سره په پرتله، په ME ګروپ کې د IL-4، IL-17، او IFN-γ د بیان کچه یوازې یو څه لوړه شوې او د احصایوي بدلون (P > 0.05) ته ندي رسیدلي.
په NPE ګروپ کې د IL-4، IL-17 او IFN-γ mRNA څرګندونې د شرم عملیات ګروپ او ME ګروپ (P <0.05) په پرتله د پام وړ لوړ رجحان ښودلی.
په مقابل کې، د ME ګروپ کې د بیان کچه کوم مهم توپیر ندی ښودلی (P> 0.05).
د لویدیځ بلاټ تحلیل د IL-4 او IL-17 په وړاندې د سوداګریزو موجودو انټي باډیزونو په کارولو سره ترسره شوی ترڅو د بدل شوي mRNA بیان نمونې تایید کړي. لکه څنګه چې په 5A,B شکل کې ښودل شوي، د ME ګروپ او د شرم عملیات ګروپ سره پرتله شوي، د NPE ګروپ کې د IL-4 او IL-17 پروټین کچه د پام وړ لوړه شوې (P <0.05). د شرم عملیاتي ګروپ سره پرتله کول، په ME ګروپ کې د IL-4 او IL-17 پروټین کچه هم د احصایې له پلوه د پام وړ بدلونونو (P> 0.05) ته رسیدو کې پاتې راغلي.
(A) په NPE ګروپ کې د IL-4 او IL-17 پروټین کچه د ME ګروپ او پلیسبو ګروپ (P <0.05) په پرتله د پام وړ لوړه وه. (ب) لویدیځ داغ هسټوګرام.
د جراحۍ په جریان کې ترلاسه شوي محدود شمیر انساني نمونو له امله، د MC د رنځپوهنې په اړه روښانه او مفصل مطالعات یو څه ستونزمن دي. موږ هڅه وکړه چې د MC حیواني ماډل رامینځته کړو ترڅو د دې احتمالي رنځولوژیکي میکانیزمونه مطالعه کړو. په ورته وخت کې، رادیولوژیکي ارزونه، هسټولوژیکي ارزونه او مالیکول بیولوژیکي ارزونه د MC کورس تعقیب لپاره کارول شوي چې د NP آٹوګراف لخوا هڅول شوي. د پایلې په توګه، د NP امپلانټیشن ماډل د 12-اونیو څخه تر 20-اونیو پورې د سیګنال شدت کې د تدریجي بدلون په پایله کې (د T1W په ترتیب کې مخلوط ټیټ سیګنال او د T2W په ترتیب کې ټیټ سیګنال)، د نسج بدلونونه په ګوته کوي، او هسټولوژیکي او مالیکولر. بیولوژیکي ارزونو د رادیولوژیکي مطالعې پایلې تایید کړې.
د دې تجربې پایلې ښیي چې بصری او هسټولوژیکي بدلونونه د NPE ګروپ کې د عصبي بدن سرغړونې ځای کې واقع شوي. په ورته وخت کې، د IL-4، IL-17 او IFN-γ جینونو څرګندونه، او همدارنګه IL-4، IL-17 او IFN-γ لیدل شوي، دا په ګوته کوي چې په فقري کې د اوټولوګس نیوکلیوس پلپوس نسج سرغړونه ده. بدن ممکن د سیګنال او مورفولوژیکي بدلونونو لړۍ رامینځته کړي. دا په اسانۍ موندل کیدی شي چې د څاروي ماډل د فقري بدنونو سیګنال ځانګړتیاوې (د T1W په ترتیب کې ټیټ سیګنال، مخلوط سیګنال او د T2W په ترتیب کې ټیټ سیګنال) د انسان د فقري حجرو سره ورته دي، او د MRI ځانګړتیاوې هم. د هسټولوژي او ناخالص اناتومي مشاهدې تاییدوي، دا د فقرات د بدن په حجرو کې بدلونونه پرمختللی دي. که څه هم د حاد صدمې له امله التهابي غبرګون ممکن د پنکچر وروسته ژر څرګند شي، د MRI پایلو ښودلې چې په تدریجي ډول د سیګنال بدلونونه د پنکچر څخه 12 اونۍ وروسته څرګند شوي او تر 20 اونیو پورې دوام لري پرته لدې چې د MRI بدلونونو د رغیدو یا بیرته راګرځیدو نښې. دا پایلې وړاندیز کوي چې په خرگوش کې د پرمختللو MV رامینځته کولو لپاره د آټولوګس vertebral NP یو باوري میتود دی.
د پنکچر دا ماډل کافي مهارت، وخت، او جراحي هڅو ته اړتیا لري. په لومړنیو تجربو کې، د پارورټیبرل لیګامینټ جوړښتونو تحلیل یا ډیر محرک کیدای شي د vertebral osteophytes د جوړیدو لامل شي. پاملرنه باید وشي چې نږدې ډیسک ته زیان ونه رسوي یا خړوب کړي. څرنګه چې د ننوتلو ژوروالی باید د ثابت او بیا تولید وړ پایلو ترلاسه کولو لپاره کنټرول شي، موږ په لاسي ډول د 3 ملي میتر اوږد ستنې د میان په پرې کولو سره یو پلګ جوړ کړ. د دې پلګ کارول د فقري بدن کې د یونیفورم برمه کولو ژورتیا تضمینوي. په لومړنیو تجربو کې، درې ارتوپيدي جراحانو چې په عملیاتو کې ښکیل وو وموندل چې د 16 ګیج ستنې د 18 ګیج ستنو یا نورو میتودونو سره کار کول اسانه دي. د برمه کولو په جریان کې د ډیرې وینې بهیدو څخه مخنیوي لپاره، د ستنې د یو څه وخت لپاره ساتل به د داخلولو یو ډیر مناسب سوري چمتو کړي، دا وړاندیز کوي چې د MC یوه ټاکلې درجې په دې ډول کنټرول کیدی شي.
که څه هم ډیری څیړنو MC په نښه کړی، د MC25,26,27 د ایټیولوژي او رنځپوهنې په اړه لږ څه پیژندل شوي. زموږ د پخوانیو مطالعاتو پراساس، موږ وموندله چې د MC12 په پیښو او پراختیا کې اتوماتیک رول مهم رول لوبوي. دې مطالعې د IL-4، IL-17، او IFN-γ کمیتي څرګندونې معاینه کړې، کوم چې د انټيجن محرک وروسته د CD4+ حجرو اصلي توپیر لارې دي. زموږ په څیړنه کې، د منفي ګروپ په پرتله، د NPE ګروپ د IL-4، IL-17، او IFN-γ لوړ څرګندونې درلودې، او د IL-4 او IL-17 پروټین کچه هم لوړه وه.
په کلینیکي توګه، د IL-17 mRNA څرګندونه د NP حجرو کې د ډیسک هرنییشن 28 ناروغانو څخه ډیریږي. د IL-4 او IFN-γ زیاتوالی کچه هم د صحي کنټرولونو په پرتله په حاد غیر کمپریشن ډیسک هیرنیشن ماډل کې وموندل شوه 29. IL-17 د اتومیمون ناروغیو کې د التهاب، نسج زخم کې کلیدي رول لوبوي30 او IFN-γ31 ته د معافیت غبرګون لوړوي. د IL-17 منځګړیتوب شوي نسج زخم په MRL/lpr موږکانو 32 او اتوماتیک حساس موږکانو کې راپور شوی. IL-4 کولی شي د proinflammatory cytokines (لکه IL-1β او TNFα) او د میکروفیج فعالول 34 منع کړي. دا راپور ورکړل شوی چې د IL-4 mRNA بیان په ورته وخت کې د IL-17 او IFN-γ په پرتله د NPE ګروپ کې توپیر درلود؛ په NPE ګروپ کې د IFN-γ mRNA څرګندونه د نورو ډلو په پرتله د پام وړ لوړه وه. له همدې امله، د IFN-γ تولید ممکن د انفلاسیون غبرګون منځګړیتوب وي چې د NP انټرکلیشن لخوا هڅول کیږي. مطالعاتو ښودلې چې IFN-γ د ډیری حجرو ډولونو لخوا تولید کیږي ، پشمول د فعال ډول 1 مرستندویه T حجرې ، طبیعي وژونکي حجرې ، او میکروفیجز 35,36، او یو کلیدي پرو - انفلاسیون سایټوکین دی چې د معافیت غبرګون هڅوي37.
دا څیړنه وړاندیز کوي چې د اتومیمون غبرګون ممکن د MC په پیښو او پراختیا کې ښکیل وي. Luoma et al. وموندله چې د MC او ممتاز NP سیګنال ځانګړتیاوې په MRI کې ورته دي، او دواړه په T2W ترتیب کې لوړ سیګنال ښیي. ځینې ​​سایټوکین د MC د پیښې سره نږدې تړاو لري، لکه IL-139. Ma et al. وړاندیز شوی چې د NP پورته یا ښکته خپریدل ممکن د MC12 پیښې او پراختیا باندې خورا لوی تاثیر ولري. Bobechko40 او Herzbein et al.41 راپور ورکړی چې NP یو معافیتی نسج دی چې نشي کولی د زیږون څخه د رګونو جریان ته ننوځي. NP protrusions د وینې رسولو ته بهرني بدنونه معرفي کوي، په دې توګه د محلي اتوماتیک غبرګون منځګړیتوب کوي. د اتوماتیک عکس العملونه کولی شي د معافیت ډیری فکتورونه رامینځته کړي، او کله چې دا فکتورونه په دوامداره توګه نسجونو سره مخ کیږي، دوی کولی شي په سیګنال کې بدلون راولي. په دې څیړنه کې، د IL-4، IL-17 او IFN-γ ډیر څرګندونه د معافیت ځانګړي فکتورونه دي، چې د NP او MCs44 ترمنځ نږدې اړیکې ثابتوي. د څارویو دا ماډل په ښه توګه د NP بریا او د پای تختې ته ننوتلو سره تقلید کوي. دې پروسې په MC باندې د اتوماتیک معافیت اغیزه نوره هم څرګنده کړه.
لکه څنګه چې تمه کیده، دا د څارویو ماډل موږ ته د MC مطالعې لپاره ممکنه پلیټ فارم چمتو کوي. په هرصورت، دا ماډل لاهم یو څه محدودیتونه لري: لومړی، د څارویو د کتنې مرحلې په جریان کې، ځینې منځني مرحلې خرگوش باید د هسټولوژیکي او مالیکولر بیولوژي ازموینې لپاره euthanized شي، نو ځینې حیوانات د وخت په تیریدو سره "د کارونې څخه راوتلي". دوهم، که څه هم په دې څیړنه کې درې وخت ټکي ټاکل شوي، له بده مرغه، موږ یوازې د MC یو ډول ماډل کړی (Modic type I change)، نو دا د انسان د ناروغۍ پراختیا پروسې استازیتوب کولو لپاره کافي ندي، او نور وخت ټکي باید تنظیم شي. په ښه توګه د سیګنال ټول بدلونونه وګورئ. دریم، د نسج په جوړښت کې بدلونونه په حقیقت کې د هسټولوژیکي داغ په واسطه په روښانه توګه ښودل کیدی شي، مګر ځینې ځانګړي تخنیکونه کولی شي په دې ماډل کې د مایکرو جوړښت بدلونونه په ښه توګه ښکاره کړي. د مثال په توګه، د قطبي رڼا مایکروسکوپي د خرگوش په انټرورټیبرل ډیسکونو کې د فایبروکارټیلج رامینځته کولو تحلیل لپاره کارول کیده. په MC او پای پلیټ باندې د NP اوږدمهاله اغیزې نورې مطالعې ته اړتیا لري.
د نوي زیلاند څلور څلویښت نارینه سپین خرگوش (وزن شاوخوا 2.5-3 کیلو ګرامه، عمر 3-3.5 میاشتې) په تصادفي ډول د شرم عملیات ګروپ، د عضلاتو امپلانټیشن ګروپ (ME ګروپ) او د اعصابو ریښو امپلانټیشن ګروپ (NPE ګروپ) ویشل شوي. ټول تجرباتي پروسیجرونه د تیانجین روغتون د اخالقي کمیټې لخوا تصویب شوي، او تجربې میتودونه د تصویب شوي لارښوونو سره سم ترسره شوي.
د S. Sobajima 46 په جراحي تخنیک کې ځینې پرمختګونه شوي دي. هر خرگوش په یو اړخیزه بیاکتنه کې ځای په ځای شوی و او د پنځه پرله پسې lumbar intervertebral discs (IVDs) مخکینۍ سطحه د پوسټرولیټرل ریټروپریتونیل طریقې په کارولو سره افشا شوې وه. هر خرگوش ته عمومي انستیزیا ورکړل شوه (20% یوریتان، 5 ملی لیتر/کیلوګرامه د غوږ د رګ له لارې). د پوستکي اوږدوالی چیری د پسونو له ښکته څنډې څخه د حوصلې کندې ته، 2 سانتي مترو ته د پارورټیبرل عضلاتو ته جوړ شوی و. د L1 څخه تر L6 پورې ښي انټرو لیټریل نخاع د ګړندۍ او ګړندۍ نسجونو، ریټروپیریټونیل نسجونو او عضلاتو (انځور 6A). د ډیسک کچه د L5-L6 ډیسک کچې لپاره د اناتوميکي نښه په توګه د pelvic برم په کارولو سره ټاکل شوې وه. د 16 ګیج پنکچر ستنې څخه کار واخلئ ترڅو د L5 vertebra پای تختې ته نږدې د 3 ملي میتر ژوروالی (انځور 6B) ته یو سوری وکاروئ. د L1-L2 انټرورټیبرل ډیسک (انځور 6C) کې د آټولوګس نیوکلیوس پلپوس د جذبولو لپاره د 5 ملی لیتر سرنج وکاروئ. د هرې ډلې د اړتیاو سره سم د نیوکلیوس پلپوس یا عضلات لرې کړئ. وروسته له دې چې د ډریل سوري ژوره شي، د جذب وړ سیونونه په ژور فاسیا، سطحي فاشیا او پوټکي کې ایښودل کیږي، په پام کې نیولو سره چې د جراحۍ په جریان کې د فقري بدن periosteal نسج ته زیان ونه رسوي.
(A) د L5-L6 ډیسک د پوسټرولیټرل ریټروپریتونیل طریقې له لارې ښکاره کیږي. (B) د 16 ګیج ستنې څخه کار واخلئ ترڅو د L5 پای تختې ته نږدې سوري ډریل کړئ. (C) Autologous MFs راټولیږي.
عمومي انستیزیا د 20٪ urethane (5 ml/kg) سره د غوږ د رګ له لارې اداره کیږي، او د lumbar spine راډیوګرافونه په 12، 16، او 20 اونیو کې د عملیاتو وروسته تکرار شوي.
خرگوش د جراحۍ څخه وروسته په 12، 16 او 20 اونیو کې د کیټامین (25.0 mg/kg) او د رګونو سوډیم پینټوباربیټل (1.2 g/kg) د انټرماسکولر انجیکشن لخوا قرباني شوي. ټوله نخاع د هسټولوژیکي تحلیل لپاره لیرې شوه او اصلي تحلیل ترسره شو. د کمیتي ریورس لیږد (RT-qPCR) او لویدیځ بلاټینګ د معافیت فکتورونو کې د بدلون موندلو لپاره کارول شوي.
د MRI معاینات په خرگوش کې د 3.0 T کلینیکي مقناطیس (GE Medical Systems, Florence, SC) په کارولو سره ترسره شوي چې د اورتوګونل لیمب کویل ریسیور سره سمبال شوي. خرگوش د 20% urethane (5 mL/kg) سره د غوږ د رګ له لارې بې هوښه شوي او بیا یې د مقناطیس دننه د لمر په ساحه کې د 5 انچ قطر د سرکلر سطحي کویل (GE طبي سیسټمونو) په مرکز کې کیښودل شوي. د کورونل T2 وزن لرونکی ځایی عکسونه (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) د L3-L4 څخه L5-L6 ته د لمبر ډیسک موقعیت تعریف کولو لپاره ترلاسه شوي. د سیګیټل الوتکې T2 وزن لرونکي سلائسونه د لاندې ترتیباتو سره ترلاسه شوي: د 2200 ms د تکرار وخت (TR) سره د تیز سپن-ایکو ترتیب او د 70 ms د ایکو وخت (TE) سره، میټریکس؛ د 260 بصری ساحه او اته محرکونه؛ د پرې کولو ضخامت 2 ملي میتر و، تشه 0.2 ملي میتره وه.
وروسته له دې چې وروستی عکس واخیستل شو او وروستنی خرگوش ووژل شو، د هسټولوژیکي معاینې لپاره شرم، د عضلاتو سرایت، او NP ډیسکونه لیرې شوي. نسجونه د یوې اونۍ لپاره په 10٪ غیر جانبدار بفر شوي فارمیلین کې تنظیم شوي، د ایتیلینډیامینیټرااسیټیک اسید سره ډیکلسي شوي، او پارافین برخې شوي. د نسج بلاکونه په پارافین کې ځای پرځای شوي او د مایکروټوم په کارولو سره د ساګیټل برخو (5 μm ضخامت) کې پرې شوي. برخې د هیماتوکسیلین او ایوسین (H&E) سره رنګ شوي.
په هر ګروپ کې د خرگوش څخه د انټرورټیبرال ډیسکونو راټولولو وروسته، ټول RNA د جوړونکي لارښوونو سره سم د UNIQ-10 کالم (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) په کارولو سره ایستل شوي او د ImProm II ریورس لیږد سیسټم (Promega Inc. , Madison, WI, USA). ریورس لیږد ترسره شو.
RT-qPCR د جوړونکي لارښوونو سره سم د Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) او SYBR ګرین جمپ سټارټ ټیک ریډی مکس (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) په کارولو سره ترسره شو. د PCR عکس العمل حجم 20 μl و او د 1.5 μl منحل شوي cDNA او د هر پریمر 0.2 μM درلود. پرائمرونه د OligoPerfect ډیزاینر (Invitrogen, Valencia, CA) لخوا ډیزاین شوي او د Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) لخوا جوړ شوي (جدول 1). لاندې د حرارتي سایکل چلولو شرایط کارول شوي: د پولیمیریز د فعالولو لومړنی مرحله په 94 ° C کې د 2 دقیقو لپاره، بیا د 15 s 40 دورې هر یو په 94 ° C کې د سانچه ډینیټوریشن لپاره، د 1 دقیقو لپاره په 60 ° C کې انیل کول، توسیع، او فلوروسینس. اندازه کول د 1 دقیقې لپاره په 72 ° C کې ترسره شوي. ټولې نمونې درې ځله پراخې شوې او اوسط ارزښت د RT-qPCR تحلیل لپاره کارول شوی. د امپلیفیکیشن ډیټا د FlexStation 3 (مالکولر وسایل، Sunnyvale، CA، USA) په کارولو سره تحلیل شوي. IL-4، IL-17، او IFN-γ جین بیان د endogenous کنټرول (ACTB) ته نورمال شوی و. د هدف mRNA اړونده بیان کچه د 2-ΔΔCT میتود په کارولو سره محاسبه شوې.
ټول پروټین د RIPA lysis buffer کې د نسج هوموجنیزر په کارولو سره له نسجونو څخه ایستل شوي (د پروټیز او فاسفیتس انابیټر کاکټیل لري) او بیا په 13,000 rpm کې د 20 دقیقو لپاره په 4°C کې د نسجونو کثافاتو لرې کولو لپاره سینټرفیوګ شوی. په هر لین کې پنځوس مایکرو ګرامه پروټین بار شوي، د 10٪ SDS-PAGE لخوا جلا شوي، او بیا د PVDF جھلی ته لیږدول شوي. بلاک کول په Tris-buffered saline (TBS) کې په 5% غیر غوړ وچو شیدو کې ترسره شوي چې د خونې په حرارت کې د 1 h لپاره 0.1% Tween 20 لري. غشا د خرگوش ضد ډیکورین لومړني انټي باډي (د 1:200 منحل شوي؛ بوسټر، ووهان، چین) (په 1:200؛ بایوس، بیجینګ، چین) کې د شپې په 4 درجې سانتي ګراد کې مینځل شوي او په دویمه ورځو کې غبرګون ښودل شوی؛ د ثانوي انټي باډي سره (د وزې ضد خرگوش امیونوګلوبولین G په 1:40,000 dilution کې) د هارسراډیش پراکسیډیز (بوسټر، ووهان، چین) سره د خونې په حرارت کې د 1 ساعت لپاره. د لویدیځ داغ سیګنالونه د ایکس رے شعاع کولو وروسته د کیمیلومینیسینټ جھلی کې د کیمیلومینیسینس زیاتوالي لخوا کشف شوي. د densitometric شننې لپاره، بلاټونه د BandScan سافټویر په کارولو سره سکین شوي او اندازه شوي او پایلې یې د ټیوبلین معافیتي فعالیت ته د هدف جین معافیتي فعالیت تناسب په توګه څرګند شوي.
احصایوي حسابونه د SPSS16.0 سافټویر کڅوړې (SPSS, USA) په کارولو سره ترسره شوي. د مطالعې په جریان کې راټول شوي معلومات د معنی ± معیاري انحراف (معنی ± SD) په توګه څرګند شوي او د دوه ډلو ترمینځ د توپیرونو د ټاکلو لپاره د تغیر (ANOVA) د یو طرفه تکرار اقداماتو تحلیل په کارولو سره تحلیل شوي. P <0.05 د احصایې له پلوه مهم ګڼل کیده.
په دې توګه، د MC د حیواني ماډل رامینځته کول د vertebral بدن کې د اتوماتیک NPs نصبولو او د میکرواناتومیکل مشاهدې ترسره کولو سره ، د MRI تحلیل ، هسټولوژیکي ارزونه او مالیکول بیولوژیکي تحلیل ممکن د انسان MC میکانیزمونو ارزولو او پوهیدو او نوي درملنې رامینځته کولو لپاره یوه مهمه وسیله شي. مداخلې
دا مقاله څنګه حواله کول: هان، سي او نور. د موډیک بدلونونو یو حیواني ماډل د lumbar spine subchondral هډوکي کې د اوټولوګس نیوکلیوس پلپوس په لګولو سره رامینځته شوی. ساینس Rep. 6، 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., and Boos, N. د لمر د نخاع د مقناطیسي ریزونانس امیجنگ: د ډیسک هرنییشن او ساتلو خپریدل، د عصبي ریښو کمپریشن، د پای تختې غیر معمولي حالتونه، او په غیر علامتي رضاکارانو کې د ګډ اوستیوآرټریتس اړخ . نرخ رادیولوژی 209, 661-666, doi:10.1148/ریډیولوژی.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, او Leboeuf-Eed, K. Modic بدلونونه او د کلینیکي موندنو سره د دوی اړیکه. د اروپا د نخاعي ژورنال: د اروپا د نخاعي ټولنې رسمي خپرونه، د نخاع د خرابوالي اروپايي ټولنه، او د رحم د نخاع د څیړنې لپاره د اروپا ټولنه 15، 1312-1319، doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma، M.، et al. د لمبر فقري پای تختو کې بدلونونه: د منځني عمر نارینه کارمندانو کې د ټیټ ملا درد او سکیاټیکا سره خپریدل او تړاو. نخاع 32، 1116-1122، doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., and Dalinka, M. د هډوکي میرو MRI د پای تختې ته نږدې د لمر د نخاعي ناروغۍ کې بدلون راولي. AJR. د راډیولوژی امریکایی ژورنال 149، 531-534، doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
موډیک، MT، سټینبرګ، PM، Ross، JS، Masaryk، TJ، او کارټر، JR Degenerative disc disease: د MRI سره د فقري میرو بدلونونو ارزونه. رادیولوژی 166، 193-199، doi: 10.1148/ریډیولوژی.166.1.3336678 (1988).
موډیک، MT، مساریک، TJ، راس، JS، او کارټر، د degenerative ډیسک ناروغۍ JR امیجنگ. رادیولوژی 168، 177-186، doi: 10.1148/ریډیولوژی.168.1.3289089 (1988).
جینسن، TS، او نور. د neovertebral endplate (Modic) وړاندوینه کونکي په عمومي نفوس کې د بدلون سیګنال. د اروپا د نخاعي ژورنال: د اروپا د نخاعي ټولنې رسمي خپرونه، د نخاع د خرابوالي اروپایی ټولنه، او د رحم د نخاع د څیړنې لپاره د اروپا ټولنه، څانګه 19، 129-135، doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB او Mannisch, K. Modic د lumbar disc herniation وروسته بدلون کوي. د اروپا د نخاع ژورنال: د اروپا د نخاعي ټولنې رسمي خپرونه، د نخاع د خرابوالي اروپایی ټولنه او د رحم د نخاع د څیړنې لپاره اروپایی ټولنه 16، 977-982، doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., and Kaapa, E. Modic ډول I بدلونونه کولی شي د ګړندي پرمختلونکي تخریب شوي ډیسک تخریب وړاندوینه وکړي: د 1 کلن احتمالي مطالعه. د اروپا سپین ژورنال 21، 1135-1142، doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu، ZJ، Zhao، FD، Fang، XQ او فین، SW موډیک بدلونونه: د لمر ډیسک تخریب کې احتمالي لاملونه او ونډه. طبي فرضیه 73، 930-932، doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
کروک، د HV داخلي ډیسک ماتول. د 50 کلونو په اوږدو کې د ډیسک پرولاپس ستونزې. نخاع (Phila Pa 1976) 11, 650-653 (1986).